李振雨* 何民友 刘晓霞 曲丽媛 周湘媛 黄彩莹 陈向东 孙冬梅
广东一方制药有限公司 广东省中药配方颗粒企业重点实验室
前言
布渣叶为岭南特色药材，主要化学成分为黄酮、生物碱、萜类、有机酸等，具有促进胃肠蠕动和胃液分泌，降血脂，退黄，抗炎、镇痛、保护心血管，抗衰老等作用，为药食两用中药，最近几年对布渣叶的重视程度增加，研究也越来越多。
传统中药以汤剂为主要用药形式，汤剂为中药发挥药效的物质基础，并经过上千年的临床实践，因此，建立中药标准汤剂的质量标准，能够为中药配方颗粒等现代中药制剂质量标准的建立提供重要参考。目前，关于布渣叶标准汤剂的研究报道尚未见到，我司在进行布渣叶配方颗粒国家标准研究中，按照《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》( 以下简称技术要求) ，对标准汤剂的关键质量指标: 出膏率、浸出物、指标性成分含量及转移率、指纹图谱进行研究，考察布渣叶饮片到标准汤剂的量值传递规律，为布渣叶配方颗粒及其相关制剂质量标准的制定提供参考。
代表性结果
布渣叶质地较轻，但化学成分复杂，饮片煎煮过程中大量成分溢出，导致标准汤剂杂质较多，影响有效成分的色谱分离与分析，采用甲醇、乙醇等极性较大的溶剂对标准汤剂进行处理时，指纹图谱基线不平稳、色谱峰分离度较差，色谱峰杂乱，小峰较多。因此，在标准汤剂供试品前处理方法中，考察了乙酸乙酯萃取的分离纯化富集方式，减少杂质的干扰，并与常规处理方式进行对比，结果显示，采用乙酸乙酯为萃取溶剂，能够显著改善杂质峰的影响，保证主要色谱峰的纯度、分离度，解决色谱图基线不平稳，部分色谱峰吸收小的问题。在色谱条件的考察中，分别考察不同的流动相洗脱系统，如乙腈-0.1%磷酸溶液、乙腈-0.1% 乙酸溶液、甲醇-0.1%甲酸溶液、甲醇-0.1%乙酸溶液等，结果显示，采用甲醇-0.1%乙酸溶液为洗脱系统，色谱峰的个数多且整体分离度较好。考虑到超高效液相色谱指纹图谱的建立，色谱柱的选择是关键，因此，本实验考察了不同粒径和品牌的色谱柱，最终选择Agilent ZORBAX SB C18色谱柱(2.1mm×150mm,1.8μm) ，各共有指纹峰的峰形及分离度最佳。
研究显示，布渣叶含有众多黄酮类成分，Xiao等采用UPLC-Q-TOF-MS/MS 技术成功从布渣叶中鉴定出31种化合物，其中28种为黄酮类，3种为酚酸类成分。药理学研究表明，黄酮类成分是布渣叶发挥消食化滞、清热利湿的重要物质基础，其代表性成分如牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷等，在布渣叶中含量较高，且在水中具有一定的溶解性，因此，布渣叶标准汤剂以牡荆苷、异牡荆苷和水仙苷为含量测定指标，并以汤剂为基础建立布渣叶饮片的含量测定方法，从而指导标准汤剂的量值传递研究。
布渣叶药材主要分布在广东、广西和海南，属于广东产道地药材。15批布渣叶药材均采自上述3个产地，具有充分的代表性。从15批标准汤剂出膏率、浸出物以及15批布渣叶饮片3种黄酮类成分的测定结果来看，不同批次的样品存在一定的差异，最大值和最小值相差2倍左右，这种差异与药材本身质量有关，符合《技术要求》的规定，未出现明显异常值。
从转移率测定结果来看，3种黄酮类成分的转移率均值在40%～60%之间，以牡荆苷的转移率最高，其次为水仙苷和异牡荆苷，转移率整体比较稳定。指纹图谱研究结果显示，从布渣叶饮片到标准汤剂，共有峰的比例产生一定的变化，OPLS-DA分析共找到5个差异显著性色谱峰，分别为峰1、2、3、4、6，除峰3未鉴别，其余色谱峰均已知，其中峰1、2、4为酚酸类成分，因此，峰3推测也为一种酚酸类。酚酸类成分在植物中是一种特殊的存在，既能作为合成其他化合物的前体，也能由多种化合物水解产生，因此，布渣叶标准汤剂中酚酸类成分相对峰面积的明显增加，考虑是在标汤煎煮过程中，由其他成分水解产生。峰6异牡荆苷与S峰牡荆苷的结构类似，极性相差不大，但转移率却有较大差异，考虑标准汤剂在煎煮过程中牡荆苷与异牡荆苷存在一定的相互转化，有待于进一步研究。
本次研究以布渣叶标准汤剂的关键质量指标为基础，对布渣叶饮片标准汤剂的量值传递进行深入的研究与分析，为布渣叶配方颗粒及其相关制剂质量标准的制定提供重要参考。该研究成果发表在《天然产物研究与开发》2023年第9期，欢迎引用(点击左下方“阅读原文”可查看全文)。
引用格式：李振雨,何民友,刘晓霞,等.基于UPLC指纹图谱和多成分定量的布渣叶饮片和标准汤剂量值传递研究[J].天然产物研究与开发,2023,35:1505-1517. Li ZY,He MY,Liu XX.et al.Study on the quantity value transfer of Microctis Folium decoction pieces and standard decoction based on UPLC fingerprintand and multi-component quantification[J].Nat Prod Res Dev,2023,35:1505-1517.
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