乳双歧杆菌Probio-M8作为一株分离自健康妇女母乳中的益生菌，经多年研究，发现其可以改善高果糖引起的高尿酸；缓解哮喘；缓解便秘、焦虑；辅助治疗冠心病和帕金森等。与此同时，对于乳双歧杆菌Probio-M8在免疫方面的作用也开展了一系列研究。本研究通过对免疫抑制大鼠模型灌服乳双歧杆菌Probio-M8并分析各项结果，来探讨其对宿主特异性免疫和非特异性免疫应答的调控作用。
实验设计
实验详情
1.实验对象
选取雌雄均等的大鼠共50只（体重180±20克），随机分为五组（空白对照组，模型对照组，低剂量益生菌组，中剂量益生菌组和高剂量益生菌组），每组10只。
2.实验过程
首先所有大鼠需先饲喂6天乳双歧杆菌Probio-M8以进行适应。第7天后，除空白对照组，其余四组大鼠每日注射环磷酰胺(CTX) 40mg/kg并连续3天，建立免疫功能抑制模型。三个益生菌组大鼠则给予不同量的益生菌进行干预，低剂量组为1x108 CFU/天，中剂量组为1x109 CFU/天，高剂量组为1x1010 CFU/天。
3.检测方法
对各组大鼠全血淋巴细胞亚群百分比，T淋巴细胞转化增殖活性，血清IgA、IgG、IL-2、IL-6、IFN-γ和TNF-α水平进行检测。
实验结果
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01 |
全血淋巴细胞亚群百分比 |
与空白对照组相比，模型对照组全血CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞百分比明显下降(P<0.05)，说明经过环磷酰胺处理后模型对照组大鼠免疫功能得到了抑制。与模型对照组相比，高剂量益生菌组大鼠全血CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞百分比明显升高(P<0.01)，而对于中低剂量益生菌组大鼠全血CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞百分比升高不显著。与模型对照组相比，高中剂量组大鼠全血B淋巴细胞百分比明显升高(P<0.05)，而低剂量组变化不明显。与模型对照组相比，高剂量组大鼠全血NK细胞百分比明显升高(P<0.01)，而中低剂量组变化不明显（表1）。
机体细胞免疫由T淋巴细胞介导，体液免疫由B淋巴细胞介导，而非特异性免疫则由NK细胞等介导。这表明乳双歧杆菌Probio-M8可以通过提高细胞免疫、体液免疫和固有免疫应答作用来增强机体免疫调节能力。
表1. 各组大鼠全血T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞百分比
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02 |
T淋巴细胞转化增殖能力 |
T淋巴细胞转化增殖实验是基于淋巴细胞对有丝分裂原的反应性，淋巴细胞转化增殖能力的强弱，在一定程度上代表淋巴细胞对外来抗原刺激反应的强弱，淋巴细胞只有成熟转化才能发挥效应，可以反映免疫细胞功能。实验发现与空白对照组相比，模型对照组大鼠淋巴细胞转化增殖活性明显降低(P<0.01)。与模型对照组相比，高中剂量组大鼠T淋巴细胞转化增殖活性均显著升高(P<0.01)（表2）。
这表明经过乳双歧杆菌Probio-M8处理后，受到免疫抑制的大鼠T淋巴细胞转化增殖能力得到了恢复。
表2. 各组大鼠T淋巴细胞准话增殖活性
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03 |
免疫球蛋白&血清指标 |
与空白对照组相比，模型对照组大鼠中IgA和IgG水平显著下降(P<0.01)；与模型对照组相比，高中剂量组大鼠血清IgA和IgG水平均显著升高(P<0.01)，而低剂量组免疫球蛋白含量变化不明显。
与空白对照组相比，模型对照组大鼠血清细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α和TNF-γ水平显著下降(P<0.01)；与模型对照组相比，高中剂量组大鼠血清细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α和TNF-γ水平显著升高(P<0.01)；而对于低剂量组则是血清细胞因子IL-2和IFN-γ水平有所升高(P<0.05)（表3）。
模型对照组大鼠免疫球蛋白和细胞因子表达都受到了抑制，从而使B淋巴细胞及Th1细胞、Th2细胞产生的IgA、IgG、IL-2和IL-6等细胞因子减少，免疫应答减弱。通过乳双歧杆菌Probio-M8处理后，大鼠血清中IgA、IgG、IL-2、IL-6、IFN-γ和TNF-α水平升高，这表明乳双歧杆菌Probio-M8可以通过促进B淋巴细胞、T淋巴细胞分泌免疫球蛋白以及Th1细胞和Th2细胞因子从而提高免疫抑制模型大鼠的体液免疫和细胞免疫功能。
表3. 各组大鼠血清IgA、IgG、IL-2、IL-6、IFN-γ和TNF-α水平
实验结论
乳双歧杆菌Probio-M8可以提高免疫抑制模型大鼠的淋巴细胞百分比、T淋巴细胞转化增殖能力以及提高血清中IgA、IgG、IL-2、IL-6、IFN-γ和TNF-α含量，从而改善细胞免疫、体液免疫以及固有免疫的应答调控，同时对于免疫抑制下大鼠的免疫调节有一定促进作用。
文章已发表于：
吉林大学学报（医学版）2020, 46(3):582-588
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