EASL中国之声丨王文世教授团队：丁肝与戊肝3项最新研究成果入选大会交流- 大数跨境

国际肝病

2023-06-23

导读：丁型肝炎（丁肝）是由丁型肝炎病毒（HDV）感染引起的一种病毒性肝炎，可与乙型肝炎病毒（HBV）联合或重叠感染。

丁型肝炎（丁肝）是由丁型肝炎病毒（HDV）感染引起的一种病毒性肝炎，可与乙型肝炎病毒（HBV）联合或重叠感染。慢性乙型肝炎患者重叠感染HDV后，约90%会发展成慢性肝炎，发生肝衰竭、肝硬化和肝癌等不良结局风险增加。由于以往对HDV的流行率和疾病负担被普遍低估，使得这一疾病没有得到应有的重视。戊型肝炎病毒（HEV）感染是全球范围内导致急性肝炎的主要病因，目前尚无特定的抗病毒药物。

第58届欧洲肝脏研究学会年会（EASL2023）暨2023年EASL大会（EASL Congress 2023）上，徐州医科大学江苏省免疫与代谢重点实验室王文世教授团队有3项最新研究摘要被收录。《国际肝病》第一时间整理，带您领略团队在丁肝与戊肝领域的最新研究进展。

追溯丁型肝炎病毒的起源和进化动力学

研究背景和目的

HDV的慢性感染可导致最严重的病毒性肝炎。虽然在40多年前就被发现，但HDV的起源和进化仍不清楚。作为HBV的卫星病毒，人们很少了解HDV和HBV之间是否存在共同进化和共同迁移的关系。这项研究旨在绘制HDV在地理上和时间上的进化动态图。

研究方法

采用贝叶斯联合分析方法，分析HDV和HBV的亲缘关系、起源时间、最快速传播期、起源地区和传播路径。

研究结果

研究发现，HDV和HBV的起源时间及其快速传播期在时间线上相隔较远。具体而言，HDV在人群中传播最早可追溯到1280年，并在1810年到1920年进化形成八个基因型，而HBV在人群中传播最早可追溯到23700年前，在1100年前完成8个基因型的进化。此外，HDV起源于南美洲，主要通过中亚地区传播到全球，而HBV起源于欧洲，主要通过非洲和东亚地区传播。两种病毒在时间和地理空间的传播路线图均不相同。尽管如此，HDV呈现出显著的地理隔离特点。HDV对HBV基因型的适应性和对人类谱系的适应性都有助于HDV进化和分支形成。

研究结论

本研究揭示了HDV的起源和演变过程。HDV和HBV的起源和传播在地理和时间上是不同的。这意味着HDV和HBV不具有共同进化和共同迁移的关系。然而，HDV的遗传多样性是由多因素驱动的，包括HBV基因型和人类谱系。该研究对解析HDV在全球的独特分布特征提供了依据。

*该研究获得“EASL Congress 2023 - Full Bursary Award”和“EASL Congress 2023 - Best Poster Presentation Award”两项大奖。

HDV不同基因型L-HDAg C-端区域调节HDV生命周期及HDV对Lonafarnib的治疗反应

研究背景和目的

HDV属于丁肝病毒科丁肝病毒属，为圆球状，呈20面体，直径约36 nm，为RNA病毒，其外膜为HBV表面抗原，内部为丁肝抗原（HDAg）与HDV RNA，基因组全长1680碱基对。HDV有8个基因型，作者先前已报道基因型1-8的不同生命周期动力学特征（J Hepatol. 2021 Aug;75(2):311-323.）。

HDV主要有8个复制环节：①HDV吸附并进入肝细胞；②在肝细胞核内复制；③HDV抗原基因从肝细胞核进入内质网并翻译成大小HDAg（S-HDAg和L-HDAg蛋白）；④S-HDAg进入肝细胞核促进HDV复制；⑤L-HDAg异戊烯化；⑥L-HDAg抑制病毒复制；⑦病毒组装；⑧病毒从肝细胞释放。

根据HDV复制循环，目前研发的抗HDV新药主要针对以下3个靶点：①进入抑制剂，如Bulevirtide等；②戊烯化抑制剂（法尼酰基转移酶抑制剂）如Lonafarnib等；③核酸多聚体，可抑制HDV进入肝细胞、抑制HDAg异戊烯化及HDV从肝细胞释放。

其中，C-端延伸是L-HDAg和S-HDAg的唯一区别，使L-HDAg能够抑制HDV复制，但也介导了HDV组装，因此是Lonafarnib的天然药物靶点。引人注目的是，这些残基在不同基因型之间差异很大。这项研究探索了L-HDAg的不同C-端在HDV生命周期中的作用以及HDV对Lonafarnib的治疗反应。

研究方法

作者构建了表达嵌合或突变L-HDAg的构建体和HDV反式互补系统，对L-HAD C-端区域在HDV的复制和病毒组装中的作用进行了详细研究。

研究结果

HDV基因型1-8的L-HDAg的C-端，尽管差异很大，但抑制HDV复制和支持病毒组装的作用相似。C-端的脯氨酸和疏水残基以及异戊烯化位点支持HBV包膜HDV。相反，异戊烯化位点，而不是脯氨酸和疏水残基，有助于L-HDAg的反式抑制功能。该发现解释了Lonafarnib对HDV的双重作用模式：①阻断HDV病毒粒子组装；②通过抑制L-HDAg异戊烯化促进细胞内HDV复制。上述作用均特异性靶向HDV的L-HDAg，而不是通过对宿主异戊烯化蛋白的脱靶效应。

研究结论

L-HDAg不同的C-端本身并不是HDV 基因型1-8具有不同动力学的潜在原因。在HDV包膜期间，L-HDAg的异戊烯化位点和疏水残基可能与S-HBsAg的疏水C-端端发生疏水相互作用，而脯氨酸可能将C-端延伸出L-HDAg以促进蛋白-蛋白间相互作用。这些发现对我们深入了解HDV的独特生命周期和指导临床Lonafarnib的应用提供了依据。

*该研究获得“EASL Congress 2023 - Full Bursary Award”奖。

miR-26a靶向USP15，通过增强RIG-I介导的I型干扰素应答强力抑制戊型肝炎病毒复制

研究背景和目的

戊型肝炎病毒（HEV）是一种非包膜、正股、单链RNA病毒，直径为27～30 nm，隶属于肝病毒科的正肝病毒。HEV有8种基因型。HEV基因型1和2仅限于人类，而基因3和4型主要引发人畜共患感染，是全球范围内引发急性病毒性肝炎的主要病因。目前没有特异性的抗HEV药物。作为宿主天然抗病毒反应的关键组成部分，小分子非编码RNA可作为一种新的抗HEV策略。然而，调节HEV生命周期的关键miRNAs仍不清楚。

研究方法

采用双荧光素酶报告基因（DLR）法测定IFN-β启动子活性。通过实时定量PCR（qRT-PCR）分别测定IFN-β、干扰素刺激基因（ISGs）和USP15的mRNA水平或HEV RNA的相对水平。USP15、RIG-I、IRF3和HEV ORF2的蛋白水平通过免疫印迹或免疫荧光测定法（IFA）验证。通过免疫共沉淀（co-IP）和免疫印迹分析，确定USP15和IFN信号通路关键元素之间的相互作用或泛素化水平。

研究结果

研究发现，miR-26a通过特异性抑制USP15的表达而抑制HEV的复制。分子机制研究表明，USP15直接与视黄酸诱导型基因I（RIG-I）相互作用，去泛素化K63连接的RIG-I，从而负调节I型干扰素（IFN）信号。相反，miR-26a通过下调USP15，促进RIG-I K63泛素化以增强I型IFN抗病毒反应，使其具有抗HEV病毒活性。有趣的是，I型IFN反应的激活可以抑制miR-26a的表达，作为一个内在的负反馈环来维持平衡的激活信号。

研究结论

本研究发现了一种新的抗HEV miRNA，并阐明了其抗病毒作用方式。miR-26a可能成为抗HEV感染的潜在抗病毒药物。

参考文献：

1. Wang Wenshi et al. Dating the origin and evolution dynamics of hepatitis D virus. Journal of Hepatology 2023 vol. 78（S1） | S100–S1212.Top-111

2. Wang Wenshi et al. The divergent C-terminus of L-HDAg regulates the dynamic life cycle of HDV and the responses to lonafarnib treatment. Journal of Hepatology 2023 vol. 78(S1) | S100–S1212.FRI-232

3. Wang Wenshi et al. miR-26a targets USP15 to robustly suppress hepatitis E virus replication via the enhancement of RIG-I-mediated type I interferon response. Journal of Hepatology 2023 vol. 78(S1) | S100–S1212.FRI-234

专家简介

王文世

教授，博士生导师，国家级高层次人才项目（青年）入选者，江苏特聘教授。在荷兰鹿特丹伊拉斯姆斯大学获博士学位，并先后以博士后和EASL Sheila Sherlock Fellow身份在荷兰鹿特丹伊拉斯姆斯大学和德国海德堡大学开展研究工作。主要研究方向为病毒性肝炎等重大传染病的基础与转化应用研究，包括乙肝病毒（HBV）与丁肝病毒（HDV）共感染、戊肝病毒（HEV）感染的致病机制、机体免疫应答与炎症发生发展、从宿主免疫与代谢这一创新角度发掘新型抗病毒药物和靶点。先后获得荷兰皇家微生物学会（KNVM）Kiem Award，荷兰消化学会（NVGE）年度最高科研奖（1st Prize NVGE Gastro-intestinal Research Award），入选荷兰消化学会官方期刊“DDD NEWS”封面人物（2019）。先后主持国家自然科学基金、欧洲肝病学会Sheila Sherlock Fellowship、欧盟微生物学会联盟（FEMS）基金等国内外基金共8项。发表SCI收录论文>40篇，其中以第一作者或通讯作者在Journal of Hepatology，Gastroenterology，Hepatology，Trends in Microbiology，Science Signaling等学术期刊发表SCI论文15篇（累计影响因子IF>150）。目前担任江苏省医学类研究生教育指导委员会委员、徐州医科大学学术委员会委员等学术任职。